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| 保質(zhì)期 | 個月 |
產(chǎn)品簡介：
1. 中文名：瓊脂糖凝膠FF
2. 英文名： DEAE Sepharose FF
3. CAS＃： 69-78-3
4. 產(chǎn)品說明：平均顆粒大?。?0μm；高流速：750cm/h;下游初步純化介質(zhì)，高流速加上高載量，可快速純化大量粗產(chǎn)品。
5. 儲存條件：4-28℃
產(chǎn)品性質(zhì)： DEAE- 瓊脂糖凝膠 FF 是將二乙胺 基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。
產(chǎn)品用途：
本產(chǎn)品具有高化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機(jī)械性能、可在位清洗、多次重復(fù)使用等特點，非特異性吸附低，回收率高，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，適用于在 pH 工作范圍內(nèi)可形成負(fù)離子的生物大分子的分離純化，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備
產(chǎn)品使用過程：
1. 裝柱
⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
⑵根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉 20% 乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液 =3 ： 1 的比例)配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。
⑷ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2. 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液，如 Tris 、 PBS 等。
3. 上樣
⑴樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。
⑵一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
⑶介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和 pH 值。鹽濃度小，介質(zhì)對樣品組分吸附較牢。用 DEAE 介質(zhì)時，推薦的 pH 值是大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點 1 個單位。
4. 洗脫
DEAE 介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小 pH 值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
5. 再生
一般用高鹽濃度的緩沖液(含 1~2mol/L NaCl ) 洗或減小 pH 洗 10 倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗( CIP ) 除去。
6. 在位清洗
⑴ 對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。
⑵ 對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用 1M NaOH 去除。
⑶ 對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用 4~10 倍柱體積的 70% 乙醇或 30% 異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用至少 3 倍緩沖液平衡柱子。
7. 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
8. 去熱源
用 0.5M 的氫氧化鈉 清洗柱子 5~6 小時或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：
⑴ 2 倍柱體積的 70% 乙醇
⑵ 2 倍柱體積 50mM Tris-Hcl pH7.5
⑶ 1 倍柱體積 4M 尿素
⑷ 3 倍柱體積的 Tris 緩沖液 +0.1M Nacl
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制
9. 消毒
用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
10. 滅菌
置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中 120 ℃下 30 分鐘。
