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產(chǎn)品名稱: 異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名: Micro Isocitrate Lyase （ICL)Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC2035          產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣        產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1780
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:   異檸檬酸裂解酶檢測試劑盒|ICL檢測試劑盒|異檸檬酸裂解酶|試劑盒

簡要介紹：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發(fā)過程中，通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。 
    ICL 催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，監(jiān)測 340nm 吸光度的減小速率可間接反應 ICL 活性。 

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體3mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL雙蒸水，充分混勻待用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL雙蒸水，充分混勻待用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑五：液體×1支，4℃保存；臨用前每支加入320μL雙蒸水，充分混勻待用；用不完的試劑仍4℃保存；
試劑六：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入5mL雙蒸水，充分混勻待用。用不完的試劑-20℃保存；
產(chǎn)品說明：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發(fā)過程中，通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。
ICL催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，監(jiān)測340nm吸光度的減小速率可間接反應ICL活性。
自備實驗用品及儀器
  紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品前處理：
1、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），15000g，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測。
2、組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；15000g ，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、紫外分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液配制：按試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：試劑五=29:35:42:42:3的比例將各試劑混合后備用。
3、樣本測定

 將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加試劑六的同時開始計時，在340nm波長下記錄10秒時的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中準確反應2分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，記錄2分10秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
注意事項：
1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
2、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
三、ICL活性計算：
A用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、組織中ICL活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ICL（U/mg prot）=ΔA ÷（ε×d）×V反總×10⁹÷(V樣本×Cpr) ÷T=2297×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ICL（U/g 鮮重）=ΔA ÷（ε×d）×V反總×10⁹÷(W÷V提取×V樣本) ÷T=2297×ΔA÷W
V反總：反應總體積，0.2×10^-3L；V樣本：加入樣本體積，0.007mL；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/moL/cm；d：微量石英比色皿光徑，1cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V提取：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；T：反應時間，2min。