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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC1075 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Pyruvate decarboxylase (PDC) activity assay kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價(jià)格：1660
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: ： 丙酮酸脫羧酶檢測(cè)試劑盒|PDC檢測(cè)試劑盒| 丙酮酸脫羧酶|試劑盒
簡(jiǎn)要介紹：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC活性。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體18mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，將試劑三和試劑四用適量試劑二溶解后再全部轉(zhuǎn)移到試劑二中備用。
試劑五：液體2mL×1瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC活性。
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量石英比色皿/ 96孔（UV板）、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、細(xì)胞或微生物樣品的制備：
先收集細(xì)胞或微生物樣品到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬(wàn)細(xì)胞或微生物加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。10000rpm，4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織樣品：
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液，冰上充分研磨。16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟：
1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）水浴提前預(yù)熱30min。
3、 操作表：
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 空白管 |
試劑一 | 140 | 140 |
試劑五 | 20 | 20 |
混合試劑 | 20 | 20 |
樣本 | 20 | - |
蒸餾水 | - | 20 |
迅速混勻后于340nm比色，記錄10s和70s的吸光值，測(cè)定管的記為A1和A2，空白管的記為A3和A4，計(jì)算ΔA=（A1-A2）-（A3-A4）?？瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。
三、PDC活性計(jì)算：
A.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算：
1、血清（漿）PCD活力的計(jì)算：
單位的定義：37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）中，每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化1 μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。
PDC（U/mL）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)]。
2、 組織中PDC活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）中，每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。
PDC（U/mg prot）=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）中，每g組織鮮重在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。
PDC（U/g 鮮重）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷W。
3、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中PDC活力的計(jì)算：
按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）中，每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol的NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。
PDC（U/104 Cell）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×500)÷T
=3.2×10-3×ΔA÷Cpr
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V總：反應(yīng)體系總體積， 0.2mL=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；Cpr：蛋白濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本鮮重，g；V提取：提取液體積，1mL；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。
B.使用96孔UV板測(cè)定的計(jì)算：
將上述公式中的d-1cm（比色皿光徑） 換為d-0.6cm（96孔板光徑） 進(jìn)行計(jì)算即可。
注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，混合試劑、試劑五和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、*兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、如果1分鐘變化值較小可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)注意修改計(jì)算公式。
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