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產(chǎn)品名稱(chēng)：胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名： Cytoplasmic Citric Acid Dehydrogenase(ICDHc) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0400            產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣         產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：320
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：胞漿異檸檬酸脫氫酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|ICDHc活性檢測(cè)|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧 生成 α-酮戊二酸，同時(shí)還原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種 NADPH 重要來(lái)源，在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。 利用 ICDHc 催化 NADP+還原成 NADPH 反應(yīng)，在 340 nm 下測(cè)定 NADPH 濃度的增加。
產(chǎn)品詳細(xì)描述

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；用時(shí)加入 50 mL 提取液溶解；
試劑二：粉劑×2 支，4℃保存；用時(shí)每支加 275μL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；用時(shí)每支加 275μL 雙蒸水充分溶解備用；

產(chǎn)品說(shuō)明：
   ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧 生成 α-酮戊二酸，同時(shí)還原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種 NADPH 重要來(lái)源，在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。 利用 ICDHc 催化 NADP+還原成 NADPH 反應(yīng)，在 340 nm 下測(cè)定 NADPH 濃度的增加。   

自備儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、 冰和蒸餾水。

操作步驟

• 樣本的前處理：

1. 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 200 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加 入 400μL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃ 離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 組織：稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測(cè)。

2. 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

• 測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，蒸餾水調(diào)零。

2. 工作液配制：將試劑一、試劑二、試劑三按 85：1：1 的比例混合。

3. 按下表步驟加樣：

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄 20 秒時(shí)的初始吸光度 A1；迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入 37℃水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng) 2 分鐘；迅速取出比色皿并擦干，記錄 2 分 20 秒時(shí)的吸光度 A2。計(jì)算 ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng)： 

1. 若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋?zhuān)?A2-A1 小于 0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。若初始值 A1 大于 0.5 可嘗試將酶液用提取液稀釋。

2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；工作液 37℃水浴放置。

3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃蒸餾水，將此燒杯放入 37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4. *兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

• ICDHc 活力單位的計(jì)算： 

1. 血清（漿）ICDHc 活力的計(jì)算:

單位的定義：每升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 μmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICDHc（U/L）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×106 ]÷V 樣本×103÷T=1608×ΔA

2. 組織中 ICDHc 活力的計(jì)算:

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICDHc（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(V 樣本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICDHc（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(W÷V 提取×V 樣本)÷T=1608×ΔA÷W

3. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 ICDHc 活力的計(jì)算:

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICDHc（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(V 樣本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

2. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活 力單位。
ICDHc（U/104 Cell）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(V 樣本×500)÷T=3.2×ΔA÷Cpr V 反總：反應(yīng)總體積，0.001L；
ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L/moL/cm；d：石英比色皿 光徑，1cm；V 樣本：加入樣本體積，0.05mL；V 提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃 度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；500：細(xì)菌或細(xì)胞密度，104 個(gè)/mL。