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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC2345 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Lipase (LPS) activity detection kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體6mL×1瓶，室溫保存。
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：59.3μL×1支，4℃保存。臨用前加入1.5 mL無(wú)水乙醇配成125 μmol/mL的油酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分溶解。用前注意解凍溶解。
產(chǎn)品說明：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于*炎和*癌。
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板（非聚苯乙烯材質(zhì)）、可調(diào)式移液槍、甲苯、無(wú)水乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
組織樣品：稱取約0.1g樣品，加試劑一1.0 mL充分研磨，于4℃，15000rpm離心30min，取上清液待測(cè)。
血清樣品：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟：
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至710nm，甲苯調(diào)零。
試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：將125 μmol/mL的油酸標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋為125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。
操作表：
| 加入試劑（mL） | 空白管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
| 試劑一 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | |
| 試劑二 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | |
| 反復(fù)震蕩混勻 | ||||
| 蒸餾水 | 0.08 | |||
| 上清液/血清 | 0.08 | |||
| 標(biāo)準(zhǔn)溶液 | 0.08 | |||
| 迅速震蕩混勻后置于37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)10 min | ||||
| 甲苯 | 0.4 | 0.4 | 0.4 | |
| 反復(fù)震蕩混勻后，室溫4000rpm離心10 min | ||||
取出離心管，小心吸取上層溶液0.3 mL，加入另一2 mL塑料離心管中，按下表操作
| 加入試劑（mL） | 空白管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
| 試劑三 | 0.075 | 0.075 | 0.075 |
反復(fù)震蕩混勻；室溫4000rpm離心10 min，小心吸取上層溶液800 μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm處測(cè)定吸光值。記為A空白管，A測(cè)定管，A標(biāo)準(zhǔn)管，計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定管-A空白管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。
三、LPS活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：以油酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b。將ΔA測(cè)定帶入方程，得到x（μmol/mL）
酶活計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算：
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (U/mg prot) =x×V樣÷（Cpr×V樣) ÷T= 0.1×x÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (U/g 鮮重) =x×V樣÷（W×V樣÷V提) ÷T= 0.1×x÷W
（3）按血清計(jì)算：
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x。
V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.2 mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。W：樣本鮮重，g；V提：提取液體積，1mL。
注意事項(xiàng)：
1、甲苯有毒，實(shí)驗(yàn)過程中需佩戴手套和口罩。
2、實(shí)驗(yàn)過程中須遠(yuǎn)離火源。
3、當(dāng)吸光度大于1時(shí)，建議將樣本稀釋后測(cè)量。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Sadenosyl methionine regulates calcium channels and inhibits uterine smooth muscle contraction in rats with infectious premature delivery through the transient receptor protein 3/protein kinase Cβ/C?kinase?activated protein phosphatase?1 inhibitor of 17 kDa signaling pathway》 作者:Jing Ge, Tao Han, Xiaoqiu Li, Lili Shan, Jinhuan Zhang, Yan Hong, Yanqiu Xia, Jun Wang, Mingxiao Hou 期刊:Experimental and Therapeutic Medicine 影響因子:1.41 PMID:29896230
