|
| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC1085 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | Alcohol dehydrogenase (ADH) activity assay kit |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價(jià)格：700
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：乙醇脫氫酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒| ADH活性檢測(cè)|試劑盒|微量法
簡(jiǎn)要介紹：
ADH 是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過(guò)程中起著 重要作用。哺乳動(dòng)物 ADH 主要在*生成，*損傷導(dǎo)致 ADH 釋放到血清中。血清 ADH 活性高低反映了肝功能是否異常。 ADH 催化 NADH 還原乙醛生成乙醇和 NAD+，NADH 在 340nm 處有吸收峰，而 NAD+沒(méi)有； 測(cè)定 340nm 吸光度下降速率，來(lái)計(jì)算 ADH 活性。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
| 商品貨號(hào)： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價(jià)： | 選擇規(guī)格 |
| BC1085- 100管/96樣 | Solarbio | 100管/96樣 | 700.00元 |  |
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，－20℃保存。
試劑四：液體×1 支，4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。
2、 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建 議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；16000g， 4℃離心 20min，取上清液置冰上待測(cè)。
3、血清等液體：直接測(cè)定。
ADH 測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在 25℃水浴中保溫 30 min。
3. 空白管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 蒸餾水、800μL 試劑二和 100μL 試劑四， 迅速混勻后于 340nm 測(cè)定吸光值變化，分別記錄 15s 和 75s 時(shí)吸光值，分別記為 A1 和 A2?！鰽 空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、800μL 試劑二和 100μL 試劑四， 迅速混勻后于 340nm 測(cè)定吸光值變化，分別記錄 15s 和 75s 時(shí)吸光值，分別記為 A3 和 A4?！鰽 測(cè)定管=A3-A4。
注意：空白管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 個(gè)酶活單位。 ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A 測(cè)定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷(Cpr×V 樣)÷T =1.61×(△A 測(cè)定管–△A 空白管) ÷Cpr
按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 個(gè)酶活單位。 ADH (μmol/min/g) =[(△A 測(cè)定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =1.61×(△A 測(cè)定管–△A 空白管) ÷W
按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 個(gè)酶活單位。 ADH (μmol/min/104 cell) = [(△A 測(cè)定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T =1.61×(△A 測(cè)定管–△A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量 （4）按液體體積計(jì)算 活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 個(gè)酶活單位。 ADH (μmol/min/mL) = [(△A 測(cè)定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷V 樣÷T =1.61×(△A 測(cè)定管–△A 空白管) ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總 體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣：加入 反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
注意事項(xiàng)：
1. 上清液蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
2. 配制好的試劑二 3 天使用完。
