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產(chǎn)品名稱:：  L-半乳糖苷-1,4-內(nèi)酯脫氫酶(Gal LDH)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: L-galactose-1,4-lactone dehydrogenase （Gal LDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1250               產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣                 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1560
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：：    L-半乳糖苷-1,4-內(nèi)酯脫氫酶檢測試劑盒|Gal LDH檢測試劑盒|Gal LDH活性檢測|試劑盒

簡要介紹：
L-半乳糖途徑是合成AsA 的主要途徑。Gal LDH 位于線粒體內(nèi)膜，負責催化植物體內(nèi)AsA 生物合成的*一步，也是該途徑的關(guān)鍵酶之一，對植物體內(nèi)AsA 含量的積累起著至關(guān)重要的作用。
    Gal LDH 催化L-半乳糖內(nèi)酯還原細胞色素c（Cyt c），還原型Cyt c 在550nm 有吸收峰。測定還原型Cyt c 增加速率，來計算Gal LDH 活性。
 
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加入40mL蒸餾水，充分溶解。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入5mL蒸餾水，充分溶解。
產(chǎn)品說明：
L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內(nèi)膜，負責催化植物體內(nèi)AsA生物合成的*一步，也是該途徑的關(guān)鍵酶之一，對植物體內(nèi)AsA含量的積累起著至關(guān)重要的作用。
Gal LDH催化L-半乳糖內(nèi)酯還原氧化型細胞色素c（Cyt c），還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測定還原型Cyt c增加速率，來計算Gal LDH活性。
自備儀器和用品：
臺式離心機、可見分光光度計、1mL比色皿、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
稱取約0.1g樣品，加提取液1mL，冰上充分研磨，13000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測。
二、Gal LDH測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到550nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 按樣本數(shù)取出一定量的試劑一在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min以上，其余的分裝保存(-20℃)。
3. 空白管：依次在1mL比色皿中加入100μL蒸餾水、800μL預(yù)熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值。
4. 測定管：依次在1mL比色皿中加入100μL上清液、800μL預(yù)熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值。
三、Gal LDH活性計算：
（1）按蛋白濃度計算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原1μmol Cyt c 為1U。
Gal LDH (U/mg prot) = [(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×10⁶]÷（Cpr×V樣）÷T
=0.289×(△A測定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘還原1μmol Cyt c 為1U。
Gal LDH（U/g 鮮重）=[(△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶]÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=0.289×(△A測定管-△A空白管) ÷W
    ε：還原型Cyt c摩爾消光系數(shù)，17.3×10³L/ mol/cm；d：比色皿光徑(cm)，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL=0.001 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1mL；V樣總：提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，2min。
注意事項：
1、在測定酶活時要注意溫度。建議取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中，在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
2、建議兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。
3、加入*一種試劑后需迅速混勻并測定OD值。