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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC2215 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | Glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) activity assay kit |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
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產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：11700
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GAPDH活性檢測|試劑盒|微量法
簡要介紹：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體×1 支，4℃保存；
產(chǎn)品說明：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
需自備的儀器和用品
分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、 研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
樣本的前處理
細菌或培養(yǎng)細胞：
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10 4 個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液）， 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加 入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。 2、樣本測定
工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其 它物種)預熱10分鐘；現(xiàn)配現(xiàn)用。
在試劑三中加入500μL蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑 4℃保存一周。
在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL 樣本、5μL試劑三和190μL工作液，混勻，加入 *一個試劑的同時開始計時，記錄340nm處20s時的吸光值A1和5min20s后的吸光值A2， 計算 ΔA=A1-A2。
GAPDH 活性計算
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1286×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。 GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W×V樣÷V樣總) ÷T =1286×ΔA÷W
按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/10 4cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T =2.57×ΔA V 反總：反應體系總體積，2×10 -4 L；
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L/mol/cm；d：比 色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應 時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
用96孔板測定的計算公式如下
按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T =2572×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。 GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T =2572×ΔA÷W
按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/10 4cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V樣÷V樣總) ÷ T=5.144×ΔA V 反總：反應體系總體積，2×10 -4 L；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反 應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
