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木質(zhì)素含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱(chēng)：Lignin content test kit
關(guān)鍵詞：木質(zhì)素|木質(zhì)素含量檢測(cè)|木質(zhì)素含量
貨號(hào)：BC4205
規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 34mL×1 瓶，4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。
試劑二：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，50mg 木質(zhì)素，4℃保存。臨用前加入 1mL 高氯酸，充分混勻溶解，配成50mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一，具有使細(xì)胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中，主要作用是通過(guò)形成交織網(wǎng)來(lái)硬化細(xì)胞壁，為次生壁主要成分。
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙?；笤?/span> 280nm 處有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。

操作步驟：
一、樣品處理：
樣品 80℃烘干至恒重，粉碎，過(guò) 40 目篩，稱(chēng)取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。
二、測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 280nm，冰乙酸調(diào)零。
2、操作表：在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑：
測(cè)定管  標(biāo)準(zhǔn)管  空白管
樣品（mg）    3       -       -
試劑一（μL）  300    300     300
高氯酸（μL）  12      -       12
標(biāo)準(zhǔn)液（μL）  -       12       -
封口膜密封，充分混勻。于 80℃水浴鍋水浴 40min，進(jìn)行乙?；Ｃ扛?10min 震蕩一次，
然后自然冷卻。
試劑二（μL）  300    300     300
充分混勻后于常溫 8000g 離心 10min，取上清。
上清液（μL）  12      12      12
冰乙酸（μL）  588    588      588
測(cè)定 280nm 下的吸光值 A，記為 A 測(cè)定管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管，計(jì)算△A=A 測(cè)定管-A
空白管、△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。


三、木質(zhì)素含量計(jì)算：
C 標(biāo)準(zhǔn)=C 原液×V 標(biāo)準(zhǔn)÷V 乙酰化×V 上清÷V 檢測(cè)=0.0196 mg/mL
木質(zhì)素（mg/g）= △A÷（△A 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)）×V 檢測(cè)÷（W×V 上清÷V 乙?；?/span>
= 0.5998×△A÷△A 標(biāo)準(zhǔn)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液在最終檢測(cè)體系中的濃度，0.0196 mg/mL；
C 原液：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，50mg/mL；
V標(biāo)準(zhǔn)：加入的標(biāo)準(zhǔn)液的體積，0.012mL；
V 乙?；阂阴；磻?yīng)體積，0.612mL；
V 上清：上清液體積，0.012mL；
V 檢測(cè)：檢測(cè)反應(yīng)總體積，0.6mL；
W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：
1、試劑一有毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。
2、加熱過(guò)程中有劇烈反應(yīng)，震蕩時(shí)輕搖，以免壓力過(guò)大噴出造成人身傷害。
3、冰乙酸具有強(qiáng)刺激性，建議操作過(guò)程全部在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。
4、取上清加冰乙酸步驟根據(jù)自己樣品乙?；潭龋宜岬挠昧靠烧{(diào)整，保證吸光值在 0.1-0.8 之間即可，并在公式中參與計(jì)算。