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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC2110 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱(chēng) | Vitamin B6 (VB6) content detection kit |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
維生素 B6 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱(chēng)：Vitamin B6 (VB6) content detection kit
關(guān)鍵詞：維生素B6|維生素B6含量檢測(cè)|維生素B6檢測(cè)
貨號(hào)：BC2110
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 18mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加入 20mL 蒸餾水混勻，如果一次性用不完，可分 裝于-20℃保存待用。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 維生素 B6，4℃保存。臨用前加入 1mL 試劑一，配成 10mg/mL（即 10000μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說(shuō)明：
維生素 B6（Vitamin B6）又稱(chēng)吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形 式存在，是一種水溶性維生素，肉類(lèi)、全谷類(lèi)、蔬菜和堅(jiān)果類(lèi)中含量較高。在機(jī)體中參與多種蛋白 質(zhì)和氨基酸的代謝，對(duì)生物體具有極其重要的作用。 VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物，在 400nm 有特征吸收峰。
實(shí)驗(yàn)室所需儀器和試劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管、蒸餾水。
操作步驟：
粗酶液提?。?/span>
組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g，加 入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織及其他蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘或反復(fù)離心 2-3 次至 上清無(wú)混濁）。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加 入 0.6mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；加蒸 餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定。 液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm，蒸餾水調(diào)零。
將 10mg/mL（10000μg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋為 125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
操作表：
在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑：
樣品對(duì)照管 樣品測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管 空白對(duì)照管
樣品（μL） 200 200 - - -
試劑一（μL） - - - 200 200
標(biāo)準(zhǔn)溶液 （μg/mL） - - 200 - -
試劑二（μL） 200 200 200 200 200
試劑三（μL） 300 300 300 300 300
試劑四（μL） - 300 300 300 -
蒸餾水（μL） 300 - - 300
充分混勻，25℃反應(yīng) 20min，測(cè)定 400nm 處吸光值，記為 A 樣品測(cè)定管和 A 樣品對(duì)照管、 A 空白管、A 空白對(duì)照管，△A=（A 樣本測(cè)定管-A 樣本對(duì)照管） （A 空白管- A 空白對(duì)照管）。 空白管、空白對(duì)照管只要做一管。
維生素 B6 含量計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制： 以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μg/mL）
維生素 B6 含量的計(jì)算：
按蛋白濃度計(jì)算 VB6（μg/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Crp）= x÷Cpr。
按樣本質(zhì)量計(jì)算 VB6（μg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W 。
按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 VB6（μg/104 cell）= x×V 提取÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）=x÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）
按液體體積計(jì)算 VB6（μg/mL）= x×V 提取÷V 提取= x
V 提?。禾崛∫后w積，1mL；
V 樣：加入的樣品體積，0.04mL；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
A 大于 0.8 時(shí)，建議將樣品用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織、豆類(lèi)種子等，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后 再測(cè)定，在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定，盡量保證反應(yīng)時(shí)間一致。
