|
| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC0250 |
| 用途 | 羥脯氨酸檢測試劑 |
| 英文名稱 | Hydroxyproline test kit |
| 包裝規(guī)格 | 50管/48樣 |
| 純度 | 現(xiàn)詢客服% |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進口 |
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：420
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: ：羥脯氨酸檢測試劑盒|HYP檢測試劑盒|羥脯氨酸|試劑盒
簡要介紹：
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP，進一補被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基ben甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃鹽酸：H2O（V/V）= 1:1，室溫保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
標準品：液體1mL×1支，0.5mg/mL 羥脯氨酸標準品，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP，進一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基ben甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。
試驗中所需的儀器和試劑：
天平、烘箱、玻璃管、離心機、水浴鍋、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
操作步驟：
一、羥脯氨酸提取
1. 組織：稱取約0.5g樣品于玻璃管，將組織盡量剪碎以便消化，蓋子稍松不密閉。加入5mL的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小時消化至沒有可見大的團塊，16000rpm，25℃，離心20min（若離心后仍有雜質(zhì)，可通過過濾去除），用10mol/LNaOH（約3mL）調(diào)節(jié)pH值至6～8范圍內(nèi)。蒸餾水定容至8mL，取上清待測。（過程中可能有黑色物質(zhì)生成，若長時間不能消化，可能為碳化的物質(zhì)）
2. 細胞：取500萬個細胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小時消化至透明狀，16000rpm，25℃，離心20min，用10mol/LNaOH（約0.5mL）調(diào)節(jié)pH值至6～8范圍內(nèi)。蒸餾水定容至2mL，取上清待測。
二、測定操作：
將標準品稀釋為15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的標準溶液。
按下表進行操作：
| 對照管 | 測定管 | 標準管 | |
| 樣本（μL） | 200 | ||
| 標準溶液（μL） | 200 | ||
| 試劑一（μL） | 200 | 200 | 200 |
| 混勻，室溫靜置20min | |||
| 試劑二（μL） | 200 | 200 | 200 |
| H2O（μL） | 600 | 400 | 400 |
| 混勻，60℃，20min，取出后室溫靜置15 min，用1mL比色皿，在560nm下分別測定對照管，測定管，標準管的OD值，并記為A對照管，A測定管，A標準管。 | |||
三、羥脯氨酸含量計算公式
標準曲線的繪制：
以標準溶液的濃度為x軸，?A標準（?A =A標準管-A對照管）為y軸，繪制標準曲線，得到方程y=kx+b。將?A測定（?A =A測定管-A對照管）帶入方程得到x。
羥脯氨酸含量的測定：
（1）按樣本鮮重計算：
組織羥脯氨酸含量（μg/g 鮮重）= x×V樣品÷（W×V樣品÷V組提）=8x÷W。
（2）按樣本蛋白濃度計算：
組織羥脯氨酸含量（μg/mg prot）= x×V樣品÷（Cpr×V樣品）=x÷Cpr。
（3）按細菌或細胞密度計算：
細胞羥脯氨酸含量（μg/104 cell）= x×V樣品÷（細胞數(shù)量×V樣品÷V胞提）=2x÷細胞數(shù)量。
V樣品：加入的樣品體積，0.2mL；V組提：組織提取液體積，8mL；V胞提：細胞提取液體積，2mL；W：樣本鮮重；細胞數(shù)量：以104計；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項：
OD值大于1，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
試劑有一定的毒性，請操作時做好防護措施，防止吸入或與皮膚接觸。
3、按樣本蛋白濃度計算時，需單獨提取樣本中的蛋白質(zhì)并測定。
相關(guān)文獻：
《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan Jiaqing Chen Yanmeng Tao Boon Chin Heng Jiakuo Yu Zheng Yang Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影響因子: PMID:30644571
